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寬場顯微通過在整個視野范圍內均勻照明樣品，使所有焦內與焦外的熒光信號同時被相機接收，是最常見的熒光成像方式。該方式常用于細胞培養觀察、組織切片熒光標記成像以及高通量篩查實驗。
由于所有光信號同時進入成像，厚樣本中容易產生離焦和背景干擾，降低成像清晰度。因此寬場顯微成像通常需要相機具備高靈敏度和低噪聲，以捕捉微弱熒光信號；同時具備較大靶面和高動態范圍，以保證在高通量和強弱信號共存條件下仍能獲得清晰穩定的圖像。